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氯离子检测试剂盒（H01法）采用H01细胞内氯离子浓度荧光探针检测氯离子浓度水平的变化。H01氯离子荧光探针采用荧光淬灭法检测氯离子水平。
H01具有极高的细胞渗透性，经过简单孵育即可实现细胞加载。穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成不易透过细胞膜的H01新产物，从而被滞留在细胞内。H01游离配体大激发波长约为351nm，最大发射波长约为460nm。当氯离子浓度升高时，H01的荧光强度随着氯离子浓度的增加而成比例地降低。
H01的荧光强度几乎不受pH变化的影响。H01的检测灵敏度比SPQ更高，并且荧光效果也比SPQ要好一些，可使用荧光显微镜、酶标仪、激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内氯离子浓度变化。
本试剂盒用于细胞内氯离子浓度变化情况的定性检测，需要细胞内氯离子浓度定量检测试剂盒产品请选择其它货号的试剂盒。
检测方法：
● 流式细胞仪● 荧光显微镜● 激光共聚焦
样本类型：
● 悬浮细胞● 贴壁细胞

组份	100T
试剂A：H01氯离子染色液	500μL

-20℃避光保存，避免反复冻融。有效期6个月。
注：
● 染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
● 可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。


激光共聚焦/流式细胞仪/荧光显微镜/荧光酶标仪，移液器，离心机，HBSS(不含酚红)或PBS(pH7.4)，HEPES缓冲液，荧光检测用黑色96孔板


● 螺旋盖微量管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
● 探针为了便于观察防止误操作导致损失，在试剂盒中时是采用透明管包装，收到后可以离心移入干燥黑色避光密封管或者用铝箔包裹避光。
● 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
● 细胞处理需要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。
● 染色后立即进行分析。
● H01融解后离心至管底部再打开螺旋盖，防止开盖时损失。
● 可以在染色溶液中加入等体积的20% Pluronic F127溶液（可选步骤），Pluronic F127可以帮助H01更快进入细胞，不建议在Pluronic F127中长期保存H01溶液。
● 标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先确定最佳条件。在正式实验前先摸索一下细胞量、氯离子荧光探针的终浓度、培养时间等，找到最佳实验条件。以下方法仅供参考。

• 染色工作液的配制：
  用HEPES缓冲液稀释H01溶液20倍（每100μL缓冲液中加入5μL染色液母液），配制成H01染色工作液。
  注：
  ● 工作液需现配现用，避免反复冻存。
  ● 不能用含血清的培养基稀释探针。可以用相应的无血清培养基稀释探针。
  
• 收集培养好的待测细胞样本，用PBS或HBSS洗涤细胞3次。
  注：
  ● 培养基血清中的酯酶会降解H01探针，从而降低H01进入细胞的效果。所以加工作液之前必须充分洗涤细胞，尽量去除培养基残留。
  
• 离心去上清后，将H01染色工作液加入细胞，在37℃避光孵育30～60分钟。
  注：
  ● 关于孵育的时间，首次预实验不能确定，建议先孵育30分钟。
  ● 根据荧光效果：如果太强，适当缩短时间；如果荧光强度太弱，适当延长时间。
  ● 染色工作液加入量以覆盖细胞即可。
  
• 用HBSS洗涤细胞3～5次。
  
• 用HBSS重悬细胞。
  
• 然后用该细胞进行荧光氯离子检测。
  激发波长351nm，发射波长460nm。
  注：
  ● 荧光强度强，氯离子浓度低。

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